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视网膜母细胞瘤SO-RB50瘤细胞诱导鸡胚绒毛尿囊膜新生血管形成的研究         ★★★
视网膜母细胞瘤SO-RB50瘤细胞诱导鸡胚绒毛尿囊膜新生血管形成的研究
作者:孙立梅 文章来源:中山大学中山眼科中心 点击数:568 更新时间:2012/9/13
目的 建立视网膜母细胞瘤鸡胚绒毛尿囊膜模型,确定肿瘤细胞接种条件;观察视网膜母细胞瘤SO -RB50瘤细胞诱导鸡胚绒毛尿囊膜新生血管变化,志在探讨瘤细胞诱导新生血管的机理。
方法 鸡胚孵化,制作孵化7天、8天、9天及10天的鸡胚CAM模型,接种1×106、2×106、4×106、6×106、9×106个SO-RB50瘤细胞,以PBS组为空白对照组,持续观察5-6天,大体拍照,取肿瘤组织切片,HE和免疫组织化学染色,光学显微镜下观察。荧光定量RT-PCR检测组织中人血管相关因子VEGFA、HIF-1α、TGFβ1及FGF-2 mRNA表达情况。
结果 孵化8天的鸡胚CAM接种6×106个瘤细胞后第3天可见肿瘤出现并逐渐增大,呈灰白的;肿瘤细胞浸润CAM,呈“巢样”生长,与人视网膜母细胞瘤肿瘤细胞形态相似,部分可见花环样结构。免疫组化CD56、NSE均阳性表达。接种数多组和接种数少组都有不同程度的新生血管生长,前者比后者新生血管出现的早,血管密度高;血管内皮VEGF阳性表达;RT-PCR检测到的血管因子主要是VEGF、FGF-2、TGFβ1和HIF-α1表达增加。
结论 视网膜母细胞瘤鸡胚绒毛尿囊膜肿瘤生长模型构建成功,瘤细胞形态学和生长特征与SO -RB50细胞株及人视网膜母细胞瘤肿瘤组织相似。SO -RB50细胞有明显的诱导新生血管的作用,主要与VEGF、FGF2等血管因子有关。
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